Oleum purum Saposhnikovia divaricata pro cereo et sapone facienda, oleum totum diffundens essentiale oleum novum pro turibulo calamo diffuso.
brevis descriptio:
2.1. Praeparatio SDE
Rhizomatum SD sicut herba exsiccata ab Hanherb Co empta (Guri, Korea). Materiae plantae taxonomice confirmatae a Dr. Go-Ya Choi Coreae Instituti Medicinae Orientalis (KIOM). Auctor specimen (numerus 2014 SDE-6) in Herbario Coreano Resources Latinarum Herbalium reposita est. Rhizoma arida SD (320 g) bis extracta cum 70% ethanolo (cum 2 h refluxu) et extractum tunc coactum sub pressione redactum. Decocta eliquata, lyophilata et condita in 4°C. Fructus extracti extracti e rudi initio materiae exsiccatae 48.13% (w/w).
Analysis chromatographica fiebat cum systemate HPLC (Aquae Co., Milford, MA, USA) et a photodiode ordinata detectore. HPLc enim analysis SDE, prim-.Ovexillum -glucosylcimifugin emptus est a Promotione Instituto Coreae pro Medicina Industry (Gyeongsan, Korea), etsec-O-glucosylhamaudol et 4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol in laboratorio nostro seiuncti erant et a analysibus spectris notati, praesertim ab NMR et MS.
SDE specimina (0.1 mg) in 70% ethanolo dissoluta (10 ml). Separatio chromatographica fiebat cum columna XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Aquis Co., Milford, MA, USA). Tempus mobile ex acetonitrile (A) et 0.1% acidum aceticum in aqua (B) ad ratem fluxum 1.0 mL/min constabat. A progressio multistep gradiente adhibita est hoc modo: 5% A (0 min), 5-20% A (0-10 min), 20% A (10-23 min), et 20-65% A (23-40 min. ). Deprehensio adsum 210-400 um lustrabatur et notata ad 254 nm. Iniectio volumen erat 10.0μL. Solutiones Latin pro determinatione trium chromonum paratae sunt ad concentratio finalis 7.781 mg/mL (prim-.O-glucosylcimifugin), 31.125 mg/mL (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol), et 31.125 mg/mL.sec-O-glucosylhamaudol) in methanolo et ad 4°C.
2.3. Aestimatio Anti-inflammatio Actioin Vitro
2.3.1. Cell Culture et Sample Treatment
RAW 264.7 cellulae ex Collectione Culture American Type (ATCC, Manassas, VA, USA) consecutae sunt et in medio DMEM continente 1% antibiotica et 5.5% FBS crevit. Cellulae in atmosphaera humidificata 5% CO2 incubatae sunt ad 37°C. Ad cellas excitandas, medium repositum est cum medio recenti DMEM, et lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) ad 1μg / mL addita in praesentia vel absentia SDE (CC vel 400μg/mL) adiectis 24 h.
Cellulae tractatae sunt cum SDE, excitatae LPS pro 24 h. Nulla productio resolvitur cum nitrite utendo Griess gerentem secundum praecedentis studii mensurando [12]. Secretio cytokinorum inflammationis PGE2, TNF-αet IL-6 definitum est ornamentum ELISA (R&D systems) secundum instructiones fabricare. Effectus SDE in NO et productionis cytokini determinati sunt ad 540 um vel 450 nm utens in visione Wallac.™lectorem microplate (PerkinElmer).
2.4. Aestimatio Antiosteoarthritis ActioIn Vivo
2.4.1. Animalia
Masculinum Sprague-Dawley mures (7 hebdomades veteres) ab Samtako Inc. (Osan, Korea) empti sunt et sub condiciones cum 12-h luce obscuro cyclo moderato habitant.° C andhumiditas %. Mures instructi sunt cum laboratorio victu et aquaad libitum. Omnes rationes experimentales factae sunt in obsequio cum Institutis Nationalibus Health (NIH) guidelines et ab Animali Cura et Usu Committee Universitatis Daejeon (Daejeon, Respublica Coreae).
2.4.2. Inductio OA cum MIA in Rats
Animalia randomized et data sunt coetuum curationum ante studiorum initiationem.per coetus). MIA solutio (3 mg/50μL of 0.9% SAL) directe injectum est in spatium intra-articularem genu recti sub anesthesia cum mixtura ketamine et xylazino inducta. Mures passim in quattuor circulos divisae sunt: (1) coetus salinarum cum injectione MIA, (2) globus MIA cum MIA iniectio, (3) coetus SDE tractatorum (200 mg/kg) cum iniectione MIA et (4. ) indomethacin- (IM-) globus tractata (2 mg/kg) cum injectione MIA. Mures oretenus cum SDE et IM 1 septimana ante MIA iniectio administrabantur per 4 septimanas. Dosis SDE et IM in hoc studio adhibita fundata est illis qui in studiis praecedentibus adhibiti sunt.10,13,14].
Post inductionem OA, statera originalis in pondere ferens facultatem hindpaws turbata est. Tester incapacitas (Linton instrumentation, Norfolk, UK) adhibita est aestimare mutationes in tolerantia pondus-ferens. Mures diligenter in conclavi mensurae collocabantur. Pondus-ferens vis membri armi supra 3 s periodum Curabitur erat. Ponderis distributio proportio computata est ab hac aequatione: [pondus in armo dextro/(pondus in armo armo dextro + pondus in membro posteriori sinistro)] 100 [15].
2.4.4. Mensurae Serum Cytokinorum gradus
Specimina sanguinis centrifugae sunt ad 1,500 g pro 10 min ad 4°C; Serum deinde collectum et conditum in -70°C usque ad usum. Gradus IL-1β, II.-6, TNF-α, et PGE2 in serum mensurati sunt utentes ELISA kits ex R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) iuxta instructiones fabricandas.
2.4.5. Real-time quantitatis RT-PCR Analysis
Totalis RNA extracta est e genu iuncturae texti utens tri reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), in cDNA et PCR reverso in cDNA amplificata utens TM One Step RT PCR ornamentum cum SYBR viridi (Applied Biosystems , Grand Island, NY, USA). Real-time quantitatis PCR fiebat utens applicata Biosystematum 7500 Real-Time PCR systema (Acta Biosystema, Grand Island, NY, USA). Sequentiae primae et probatio sequentia in Tabula monstrantur1. Aliquots specimen cDNAs et GAPDH cDNA aequalis copia ampliata sunt cum TaqMan® PCR universali magistro mixtura, quae DNA polymerases continet secundum instructiones fabricandas (Acta Biosystema, Foster, CA, USA). PCR conditiones fuerunt 2 min ad 50°C, 10 min ad 94°C, 15 s ad 95°C, et 1 min ad 60°C ad 40 circuitus. Concentratio scopo gene utens comparativo Ct (limen cycli numeri in transverso inter amplificationis insidias et limen) methodum, secundum instructiones fabricare.
Osteoarthritis (OA) frequentissima est inordinatio musculoskeletalis et frequentissima in senibus degenerativi morbi articularis.1]. OA conditio partim laesione causata, amissione cartilaginis structurae et functionis, et dysregulationis meatus proinflammatorii et anti-inflammatorii.2,3]. Praesertim cartilaginem articularis ac subchondralem ossis artuum synovialium attingit et consequitur in defectu articularis, ducens dolorem ad pondus sustinentem ambulationem et stantem.4].
Nullum remedium est OA, quod difficillimum est cartilaginem semel corruptam restituere.5]. Curationis proposita sunt dolorem lenire, mobilitatem iuncturam conservare vel emendare, vires artuum augere et inactivare morborum effectus obscurare. Curae pharmacologicae OA intentum est ad dolorem minuendum ut munus iuncturam patientis et qualitatem vitae augeat. Quamquam interitus cartilaginis praecipuus eventus est in OA, degradatio collageni est fundamentalis incidentiae quae statuit irreversibilem progressionem OA in consociatione cum inflammatione.6,7]. Curationes cum activitate anti-inflammatione et chondroprotectiva exspectantur ut dolorem leniant et matrix integritatem in OA aegris sustineant.
Ergo inflammatio decrescente in OA administratione profutura erit. Recentes studia partes tutelae pro opibus herbalibus in progressione OA suadeant, chondrocytae inflammationem et cartilaginem ulteriorem destruendi, per facultatem mutuam cum texturis articulariis adiunctis, in diminutione doloris iuncturae resultantes.8].
Radix autemSaposhnikovia divaricataSchischkin (Umbelliferae) in medicina tradita late usus est ad curationem capitis, doloris, inflammationis, et arthritis in Corea et Sinis.9,10]. Diversi effectus pharmacologiciSaposhnikovia divaricata(SD) etiam anti-inflammatorias, analgesicas, antipyreticas et antiarthriticas proprietates comprehendunt.9,11]. Recens studium demonstratum SD chromone extractum habere effectum arthritis antirheumatoidei potentialem in muris arthritis collagen-inducti exemplarium [10] ; pauca tamen studia ad anti-inflammationem et antiarthritem activitatem actionis sustinendae suntSaposhnikovia divaricataextractum (SDE).
Ergo praesens studium investigavit anti-inflammatoriae et antiosteoarthritis actionis LXX% ethanolicae extracti SD. Primum, effectus anti-inflammatorius SDE aestimatus estin vitroin LPS effecerunt RAW 264,7 cellulae. Deinde effectus antiosteoarthritis SDE mensuratum est perpendendis distributionem pondus-ferentem, degradationem cartilaginis articularis, et responsiones inflammationes in rat exemplar monosodium iodoacetate- (MIA-) inductum OA.